مقدمة للمعالجة التنظيمية

تشير معالجة الأنسجة ، إلى سلسلة من الخطوات الضرورية لإعداد الأنسجة الحيوانية أو البشرية من مرحلة التثبيت إلى حالة التسلل بما فيه الكفاية بالشمع النسيجي المناسب ، السماح لها بالتقطيع على ميكروتوم.

أهمية معالجة الأنسجة

غالبًا ما يؤكد مديرو المختبرات على أهمية معالجة الأنسجة لموظفيهم. من المهم أن نفهم أن استخدام جدول معالجة غير مناسب أو ارتكاب أخطاء أساسية (مثل التجديد غير الصحيح أو تسلسل الكواشف) يمكن أن يؤدي إلى كون عينات الأنسجة غير قابلة للتقطيع. هذا يعني أنها لن تعطي أي معلومات مرئية مفيدة. هذا الوضع شديد بشكل خاص في الأنسجة التشخيصية البشرية لأن العينات بأكملها تتم معالجتها في دفعة واحدة. في حالة تلف الأنسجة في مثل هذه الحالات ، قد لا يكون هناك أنسجة احتياطية متاحة لمزيد من التحليل ، مما يؤدي إلى موقف يجب أن يشرح فيه المختبر للمريض سبب عدم إمكانية إجراء التشخيص. على الرغم من فشل الميكانيكية أو الكهربائية منماكينة آلية لمعالجة المناديليمكن أن تحدث ، معظم مشكلات المعالجة ناتجة عن أخطاء بشرية. ولذلك ، فإن التأكيد على أهمية التعليم والتدريب المناسبين للعاملين في معالجة الأنسجة أمر بالغ الأهمية. يجب ممارسة الحذر عند إعداد برامج المعالجة لأي تشغيل لضمان أفضل النتائج.

نظرة عامة على خطوات معالجة أنسجة قسم البارافين

1. جمع عينات جديدة

تأتي عينات الأنسجة الطازجة من مصادر مختلفة وتكون عرضة للتلف عند إزالتها من المرضى أو حيوانات التجارب. لذلك ، يجب التعامل معها بعناية وثابتة في أقرب وقت ممكن بعد التشريح. من الناحية المثالية ، يجب أن يحدث التثبيت في موقع الاستخراج ، كما هو الحال في غرفة العمليات. إذا لم يكن ذلك ممكنًا ، فيجب تثبيته فور وصوله إلى المختبر.

2. التثبيت

تغمر العينة في مثبت سائل ، مثل محلول الفورمالديهايد مثل الفورمالين. يتسلل هذا العامل بالتدريج إلى الأنسجة ، فيحدث تغييرات كيميائية وفيزيائية تصلّب الأنسجة وتحافظ عليها مع حمايتها خلال مراحل المعالجة اللاحقة. عدد قليل فقط من الكواشف مناسبة للتثبيت لأنه يجب أن يكون لها خصائص محددة مناسبة لهذه المهمة. على سبيل المثال ، يجب أن تحتفظ مكونات الأنسجة بتفاعل كيميائي معين لتطبيق تقنيات تلطيخ محددة لاحقًا. الفورمالين (عادةً ما يكون الفوسفات مخزنًا) هو المثبت الأكثر استخدامًا للحفاظ على الأنسجة التي ستتم معالجتها في أقسام البارافين. من الناحية المثالية ، يجب أن تبقى العينات في محلول التثبيت لفترة كافية للتسلل إلى جميع أجزاء الأنسجة ، تليها فترة تسمح بالتثبيت الكيميائي للتفاعل بالتعادل (وقت التثبيت). بشكل عام ، يجب أن يكون وقت التثبيت للعينات من 6 إلى 24 ساعة. تعتبر معظم المختبرات خطوة التثبيت هي المرحلة الأولى من برنامج المعالجة. بعد التثبيت ، قد تتطلب العينات مزيدًا من التشريح لتحديد المناطق المناسبة للتقييم. يتم وضع العينات المعالجة في كاسيتات وصفت بشكل صحيح (سلال صغيرة مثقبة) لتمييزها عن العينات الأخرى. تعتمد مدة معالجة العينات على حجم ونوع أكبر وأصغر العينات ، والمعالج المحدد المستخدم ، والمذيبات المختارة ، ودرجة حرارة المذيبات ، والمتغيرات الأخرى.

3. الجفاف

بما أن شمع البارافين المنصهر مضاد للماء (لا يخلط جيدًا بالماء) ، فمن الضروري إزالة معظم المياه من العينات قبل تسلل الشمع. تتضمن هذه العملية عادة غمر العينات في سلسلة من محاليل الإيثانول (الكحول) لزيادة التركيز ، وبلغت ذروتها في الإيثانول المطلق. يمكن خلط الإيثانول مع الماء بأي نسبة ، ليحل محل الماء تدريجيا في العينات بالكحول. باستخدام تسلسل تركيز متزايد تدريجيا يقلل من تشوه الأنسجة الزائد.

بالنسبة للعينات التي لا يزيد سمكها عن 4 ، فإن تسلسل الجفاف النموذجي هو:

لأخذ الإيثانول 15 دقيقة

لأخذ الإيثانول 15 دقيقة

لأخذ الإيثانول 15 دقيقة

لأخذ الإيثانول 15 دقيقة

إنتاج الإيثانول لمدة 30 دقيقة

اينول لمدة 45 دقيقة

عند هذه النقطة ، يجب إزالة جميع مياه العينة ، باستثناء كميات ضئيلة من المياه (الجزيئية) المرتبطة بإحكام.

4. المقاصة

للأسف ، على الرغم من أن الأنسجة تحتوي الآن على الحد الأدنى من المحتوى المائي ، إلا أننا لا نزال لا نستطيع التسلل إليها بالشمع لأن الشمع والإيثانول لا يختلطان جيدًا. لذلك ، يجب استخدام مذيب وسيط متوافق مع كل من شمع الإيثانول والبارافين. سيحل هذا المذيب محل الإيثانول في الأنسجة ، والذي سيتم استبداله بعد ذلك بشمع البارافين المصهور. وتسمى هذه المرحلة من البرنامج بالتنظيف ، وتعرف المواد الكيميائية المستخدمة باسم وكلاء المقاصة. تم اختيار مصطلح المقاصة ولكن ليس لأن العديد من (جميع) وكلاء المقاصة ، بسبب مؤشر الانكسار العالي نسبياً ، يمكنهم توفير درجة من الوضوح البصري أو الشفافية للنسيج. أخرى حرجةوظيفة وكلاء المقاصة هي إزالة كميات كبيرة من الدهون من الأنسجة ، لأن الدهون من شأنها أن تعيق تسلل الشمع.

الزيلين هو عامل تطهير شائع الاستخدام ، يتطلب تغييرات متعددة لاستبدال الإيثانول بالكامل.

بالنسبة للعينات التي لا يزيد سمكها عن 4 ، يتضمن تسلسل المقاصة النموذجي ما يلي: الزيلين 20 دقيقة ، الزيلين 20 دقيقة أخرى ، الزيلين 45 دقيقة.

5. تسلل الشمع

في هذه المرحلة ، يتم تسلل الأنسجة بالشمع النسيجي المناسب. على الرغم من تقييم العديد من الكواشف المختلفة واستخدامها على مر السنين لإنجاز هذه المهمة ، لا يزال الشمع النسيجي القائم على البارافين هو الأكثر استخدامًا على نطاق واسع. يبقى الشمع القياسي سائلاً عند 60 درجة مئوية ويمكن إدخاله في الأنسجة عند درجة الحرارة هذه ، ثم يبرد إلى 20 درجة مئوية ليصلب إلى نسيج مناسب للتقطيع المتسق. تتكون هذه الشموع من البارافين المنقى وإضافات مختلفة ، ربما تشمل الراتنجات مثل الستايرين أو البولي إيثيلين. من الضروري أن نفهم أن هذه المكونات لها خصائص فيزيائية محددة ، مما يسمح بتقطيع الشمع إلى شرائح رفيعة ضيقة تصل إلى 2 ميكرون ، وتشكيل شرائط عند قطعها على ميكروتوم ، والحفاظ على المرونة الكافية لتبقى مسطحة عند الطفو على حمام الماء الدافئ.

بالنسبة للعينات التي لا يزيد سمكها عن 4 ، فإن تسلسل التسلل النموذجي هو:

الشمع 30 دقيقة

الشمع 30 دقيقة

الشمع 45 دقيقة

6. التضمين أو الحجب

بمجرد أن تتسلل العينات تمامًا بالشمع ، يجب أن تُشكَّل إلى كتلة من من من أجل تركيبها على ميكروتوم للتقسيم. تتضمن هذه العملية استخدام مركز التضمين ، حيث يُسكب الشمع المصهور في قالب ، وتوضع العينة فيه. من الأهمية بمكان إيلاء المزيد من الاهتمام للتوجيه الصحيح للعينة داخل القالب ، حيث أن موضع العينة سيملي تكلفة الطائرة للتقسيم ، وهو أمر حيوي في الأنسجة التشخيصية والبحثية. ثم يتم وضع حلقة التضمين على الجزء العلوي من القالب ، ويضاف المزيد من الشمع ، ويتم وضع التجميع بالكامل على طبق بارد لتتصلب. بمجرد اكتمال هذه العملية ، يمكن إزالة كتلة الأنسجة مع حلقة التضمين المرفقة بها من القالب ، جاهزة لاستئصال الميكروبات. تجدر الإشارة إلى أنه إذا تمت معالجة الأنسجة بشكل صحيح ، فإن كتلة الشمع التي تحتوي على عينة الأنسجة متينة للغاية ويمكن أن تكون بمثابة مادة أرشيفية أساسية.